高效液相色谱图怎么分析【高效液相色谱图】

1、您好，您可以将网盘上的课件下载到本地电脑，然后将其导入到希沃白板中。

1、流动相的处理：我们要将流动相先抽滤（使用隔膜真空泵）再超声。超声过程中需开盖，因为超声过程中可能会有气体溢散出来。。

2、每次更换流动相均需要排气：打开AB泵的电源，旋转旋钮到OPEN，点击purge进行排气，排完之后点击CE回到正常界面，然后旋转旋钮到CLOSE。。

3、点击A泵，调节A、B泵流动相比例，点击Enter,点击CE返回，再点击func调节流速，后点击pump启动泵。。

4、调节波长：点击func调节波长，点击Enter，再点击CE返回。进样时，先将旋钮扳至load，进完样后，扳至inject.。

5、每次进样前以及每日关闭机器前，均须先将有机流动相比例调至，再使用有机流动相进样冲洗柱子，调小流速，待谱线平稳，即可进样或者关闭机器。。

6、高相液相色谱的数据可以通过N2000色谱在线以及离线工作站来进行观察。。

1、流动相的处理：我们要将流动相先抽滤(使用隔膜真空泵)再超声。

2、超声过程中需开盖，因为超声过程中可能会有气体溢散出来。

1、色谱图，其实简单地讲，是一个横坐标是时间，纵坐标是电信号的二维图谱。

2、高效液相色谱法，你可以简单地想象，固定相是一个多空海绵状的柱形结构，样品在孔洞中进进出出。

3、因为各个物质的吸附能力不同，所以才会在色谱图中拉开距离。

4、和实验相关的参数、保留时间-也就是可以定性的数据参数如果使用同样的色谱柱，同样的流动相，分析同样的样品，那么这个样品的保留时间，应该是固定的。

5、不同保留时间的色谱峰，应该表现出的是不同的物质。

6、如果你跑的是反相色谱，那么色谱峰越靠后，它对应物质的极性也就越小。

7、峰面积-也就是可以定量的数据参数这是你在色谱图中可以读出来的参数，在同一个色谱条件下，同一个物质的浓度和峰面积是成正比的。

8、也就是说，如果你配制0mg/ml的X物质，进样后峰面积是10000，那么，你配制0.5mg/ml的X物质，进样后峰面积差不多就是5000波长-这个是可以顺利进行试验的前提条件同一样品，同一方法，同一色谱柱，在不同波长的峰面积是不同的。

9、一个物质指在某些特殊波长下有吸收。

10、比如一个物质在210nm和254nm处有吸收。

11、那么波长在280nm处可能无法检出该物质。

12、所以一个实验方法开始时要进行波长扫描。

1、东西太多太杂了，色谱峰基本都未完全分开，建议先按出峰时间分大段，收集浓缩，再细分。

1、使用高效液相色谱时,液体待检测物被注入色谱柱,通过压力在固定相中移动,由于被测物种不同物质与固定相的相互作用不同,不同的物质顺序离开色谱柱,通过检测器得到不同的峰信号,后通过分析比对这些信号来判断待侧物所含有的物质.高效液相色谱作为一种重要的分析方法,广泛的应用于化学和生化分析中.高效液相色谱从原理上与经典的液相色谱没有本质的差别,它的特点是采用了高压输液泵、高灵敏度检测器和高效微粒固定相,适于分析高沸点不易挥发、分子量大、不同极性的有机化合物.高效液相色谱使用粒径更细的固定相填充色谱柱,提高色谱柱的塔板数,以高压驱动流动相,使得经典液相色谱需要数日乃至数月完成的分离工作得以在几个小时甚至几十分钟内完成.。

1、高效液相色谱图分析要参考多方面因素。

2、现在氏启迹以液相色谱反相谱图CVWD检测器进行分析。

3、出峰越靠前，说明物质极性越大，同时说明结构中含杂原子，极性键，比如羧基，氨基，等。

4、峰响应值越高，说明有机物中共轭越多，有时物质已经带了颜色，进入可见区。

5、峰型不好时，多是含双(多)基团，尤其是氨基酸类。

6、根据PH调整看峰型，能基本判断PKA，有利于判断物质结构。

7、多种歼并条件分离都很困难时，并且峰型相似，一般多是两种或多种异构。

8、通过出峰顺序可判断物质处理(如重结晶)所使用溶剂。

9、旁举波长与响应值对应，来判断可能结构。

10、(相当于四大谱之一的紫外)。

1、分析色谱图手动进样步骤配置好流动相，将滤嘴洗头放入流动相页面内，打开泵和检测器，快跑排除气泡，设置既定流速，稳定一段时间，让基线跑平，用液相针吸取称量融配脱气后的对照(含量已标定)，打开定量环将液相针里的液体匀速注入定量环中，拔出针头好立刻关闭六通阀，一般随六通阀关闭电脑自动采样，等主峰跑完整后记录其峰面积，一般跑两个对照，每个对照跑两针，共四针。

2、然后开始注称好溶配脱气后的样，以对照主峰的保留时间来判断样品中目标峰的位置，外标法以峰面积计算供试品中某物质的含量。

3、X=(S样*K/m样(1-水分))*对照品含量%*100X、供试品的含量(%)S样、供试品的主峰面积K、单位面积对照品的质量m样(1-水分)、称取供试品折干后的质量(mg)X对、对照品的含量(%)(我是用仪器的，不是做广告的，推荐你去海川论坛的化工分析版块儿上去深入的学习，知识是积累起来的，不是一个问题一个答案这么简单，海川里介绍还算比较丰富的，仪器信息网针对仪器本身有一些。

4、)仪器自身的原理请看参考资料URL(随手找的)。

1、基本的信息是二维的、不同时间点的响应值。

2、通过对谱图的处理(计算机完成)，得到保留时间和峰面积(及峰高)，前者用于定性，后者用于定量。

3、普通的UV检测、ELSD检测、RI检测等，要用对照品定位和定标，MS检测可用MS谱图定性，定量仍需对照品。

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